第一部分分子生物學實驗基礎知識

第1章分子生物學實驗室規(guī)則和安全/2

1.1實驗室一般規(guī)則/2

1.2實驗室常識/2

1.3實驗室安全基礎知識/3

1.4實驗室合理設計和布局/4

1.5實驗室急救/4

1.6廢棄物、放射性物質(zhì)及有毒物質(zhì)的處理/5

第2章分子生物學實驗常用儀器設備及其操作/7

2.1分子生物學實驗常用儀器設備/7

2.2冷凍離心機/8

2.3電泳儀/9

2.4分析天平/10

2.5分光光度計/10

2.6數(shù)字式酸度計/11

2.7普通PCR儀/12

2.8實時熒光定量PCR儀/13

2.9凝膠成像系統(tǒng)/14

2.10多功能微孔板酶標儀/15

2.11搖床/16

2.12水的凈化裝置/16

2.13消毒設備/17

第3章細菌培養(yǎng)常用培養(yǎng)基和抗生素溶液的配制方法/19

3.1常用培養(yǎng)基的配制方法/19

3.2常用抗生素溶液的配制方法/20

第4章GenBank數(shù)據(jù)庫簡介/22

4.1概述/22

4.2GenBank的建立與發(fā)展/23

4.3GenBank數(shù)據(jù)庫結(jié)構(gòu)/25

4.4基因基本信息檢索/29

4.5GeneBank在分子生物學中的應用/30

分子生物學實驗目錄第二部分分子生物學常用實驗技術

第5章核酸的制備/36

5.1核酸制備的原理與方法/36

5.2質(zhì)粒的生物學特性/39

5.3常用克隆載體的特征/41

實驗1真核生物基因組DNA提取/42

實驗2總RNA的提取及鑒定/44

實驗3質(zhì)粒DNA的微量提取和鑒定/48

第6章DNA的酶切和凝膠電泳/51

6.1限制性核酸內(nèi)切酶的特性及應用/51

6.2瓊脂糖凝膠電泳/53

6.3聚丙烯酰胺凝膠電泳/55

實驗4DNA的限制性核酸內(nèi)切酶酶切及凝膠電泳/57

第7章DNA轉(zhuǎn)化/61

7.1感受態(tài)細胞的制備/61

7.2轉(zhuǎn)化/61

實驗5大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備和轉(zhuǎn)化/63

第8章DNA重組的基本流程和方法/68

8.1目的基因的獲取/68

8.2DNA分子的體外重組/69

8.3DNA重組體的導入/70

8.4受體細胞的篩選/72

8.5基因表達/73

實驗6DNA片段的黏性末端連接法/74

實驗7DNA片段的黏�财蕉诉B接法/75

實驗8重組子的篩選與鑒定/77

第9章聚合酶鏈式反應技術/80

9.1常規(guī)PCR技術的原理及操作/80

9.2引物設計原則及合成/84

9.3PCR產(chǎn)物的純化與鑒定/85

9.4PCR技術的延伸及應用/87

實驗9PCR擴增特異性DNA片段及擴增產(chǎn)物的純化與鑒定/91

實驗10實時熒光定量PCR技術檢測基因的表達量/93

第10章核酸雜交技術/98

10.1幾種核酸探針標記方法/98

10.2核酸探針制備和純化技術/101

實驗11核酸探針制備和純化/109

實驗12菌落原位雜交法/112

實驗13miRNA原位雜交/114

第三部分分子生物學綜合性、研究性實驗

第11章外源基因的表達/118

11.1外源基因在原核生物中的表達/118

11.2外源基因在酵母細胞中的表達/125

實驗14外源基因在大腸桿菌中的誘導表達/130

實驗15SDS�睵AGE電泳檢測表達的外源蛋白/131

實驗16脂肪酶基因在枯草桿菌中表達及表達產(chǎn)物的研究/133

實驗17外源基因在酵母細胞中表達及表達產(chǎn)物的研究/135

第12章利用分子生物學技術進行細菌的種屬鑒定/137

12.1微生物分類鑒定方法的發(fā)展/137

12.216S rDNA分類鑒定技術的原理/138

實驗18利用16S rDNA序列分析技術進行細菌種屬的鑒定/139

第13章基因表達差異的分析/144

13.1差減雜交/144

13.2mRNA差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR/145

13.3cDNA代表性差異分析/145

13.4差減抑制消減雜交方法/146

實驗19半定量RT�睵CR技術檢測基因的表達差異/147

附錄/152

附錄A常用單位及換算方法/152

附錄B常用核酸、蛋白質(zhì)換算數(shù)據(jù)/152

附錄C核酸的單位及有關數(shù)據(jù)/153

附錄D常見核酸分子的長度和相對分子質(zhì)量/153

附錄E色素在聚丙烯酰胺凝膠中的移動參數(shù)/154

參考文獻/155